浙江微流纳米生物技术有限公司
脂质体是巨噬细胞的天然吞噬对象之一。脂质体进入血液循环后，主要被网状内皮系统(RES)吞噬而被动靶向于RES，包括肝、脾、肺等组织。中医药在治疗癌症等疑难病症有较大的优势。脂质体在药物中的应用受到了广泛的关注，并取得了很大的成果。将升麻素与脂质体的结合起来，为中药成分使用和研究开辟了新思路。
升麻为毛茛科植物大三叶升麻，兴安升麻或升麻的干燥根茎。具有清热解毒升举阳气的功效。临床上用于治疗风热头痛、咽喉肿痛、子宫脱垂等症，升麻在近年来的研究中也被发现有良好的抗肿瘤活性。升麻素就是其中的色原酮类成分。
本文将简介升麻素脂质体制备，并对其表征结构进行分析。
实验仪器
高效液相色谱仪；声仪；电子天平；离心机；脂质体挤出器（苏州微流纳米）；激光光散射仪
图１.Genizer 手动型脂质体挤出器
实验试剂
大豆卵磷脂；胆固醇(cholesterol(ovinewool)(>98%）；甲醇；三氯甲烷；升麻素；PBS缓冲液；聚碳酸酯膜
实验步骤
升麻素脂质体的制备（薄膜挤出法）
精密称取大豆卵磷脂11.31mg、胆固醇11.61mg和升麻素三氯甲烷溶液5mL(含升麻素1.176mg），溶解于50mL磨口梨形瓶中，并加入四氟球若干，45℃水浴中减压旋蒸以除去三氯甲烷，形成均匀透明的薄膜。油泵抽真空过夜。在蒸发得到的类脂膜中加入PBS缓冲液3mL，水浴45℃水浴常压旋转30min，声处理1min，继续水浴旋转20min，使膜充分溶胀水合。水合得到的脂质体混悬液过100nm 的聚碳酸酯膜，经手动型脂质体挤出器往返挤压21次，制得升麻素脂质体。
检测结果
1）升麻素脂质体的制备
实验制得乳白色升麻素脂质体3mL，均匀无沉淀，激光笔照射示有丁达尔现象。
2）脂质体包封率测定方法建立
绘制升麻素标准品标准曲线，结果如图２和表1所示，制得升麻素HPLC标准曲线线性良好。
图２.升麻素HPLC标准曲线图
表1.升麻素HPLC标准曲线表
实验测得样品保留时间为14.648min，与标准品保留时间一致，样品峰面积为698.53131。代入标准曲线得包封率为86.49%。
3）载药脂质体的粒径测定结果见图3。
载药脂质体粒径为73.93nm，且粒径分布也比较窄，样品PdI为0.347。说明体系中的样品很均匀。
图３.脂质体粒径分布
4)载药脂质体的稳定性考察
载药脂质体在冰箱中放置时间为一周时取出。外观颜色均匀，底部没有沉淀，粒径检测如图４所示。放置两周后取出，外观依旧颜色均匀，底部并无沉淀产生，粒径检测如图５所示.。所制脂质体在两周内外观和粒径均非常稳定。
图４. 保存一周脂质体粒径分布图
图５. 保存两周脂质体粒径分布图
结论
本实验通过经典薄膜-挤出法制备了升麻素脂质体，这种l利用脂质体挤出器的制备方法相对成熟，且粒径分布良好，过程相对可控，为脂质体制备的主要方法之一。挤出时通过手动型脂质体挤出器往返挤出21次，通过薄膜孔径控制得到的脂质体粒径更稳定。
实验成功制得升麻素脂质体，建立简单快速测量其包封率的方法并对其粒径进行了分析。制得升麻素包封率为86.49%，平均粒径为73.93nm，PdI为0.347，分布较窄，4℃下储藏稳定性好，符合设计要求。为进一步研究升麻素脂质体的性质提供了很好的铺垫。
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