不同结构的脂质体

　　脂质体是以磷脂为壁材，在水中自聚集形成的具有双分子层结构的一种微球状粒子。脂质体的大小从20 nm 到几个微米，它们可能是由一个或几个同心或非同心的膜组成，每个膜层厚度约4 nm。根据脂质体的大小和脂质双分子层数目，脂质体可分为单室脂质体和多室脂质体。单室脂质体可分为小单室脂质体（SUV,20-100 nm）、大单室脂质体（LUV, >100 nm）和巨大单室脂质体（GUV, >100 nm）；多室脂质体可分为多室脂质体（MLV, >500 nm）和多囊泡脂质体（MVV, >1000nm）。

图1.不同结构的脂质体

常用脂质体制备方法对比

　　当磷脂在温和搅拌的情况下分散在水溶液中时即可形成多室脂质体MLVs，而大单室脂质体LUVs 和小单室脂质体SUVs 的制备则需要大量能量的输入以破坏多室脂质体MLV 和囊泡脂质体MVV 的结构，如声、均质、加热等。

非机械法（Non-mechanical methods）

1）薄膜分散法（Thin-layer dispersion）

　　薄膜分散法即伯明翰法（Bangham），该法是将类脂质先溶解于有机溶剂中，再通过旋转蒸发仪去除有机溶剂，待脂质形成一层薄膜后，加入水相水化洗膜形成较为均匀的悬浊液即为脂质体。薄膜分散法是迄今为止制备脂质体较简单的方法，但是包封率低，形成的粒径较大。

2）反复冻融法（Freeze-thawing method）

　　反复冻融法前段制备过程与薄膜分散法类似，在得到脂质体悬液后通过反复冷冻融解操作得到脂质体。反复冻融法具有包封率高、均一性好的优点，但制备所需时间长。

3）有机溶剂注入法（Solvent injection method）

　　有机溶剂注入法即先将类脂质用有机溶剂溶解，再将脂质有机溶液注入高速搅拌的水相里，形成脂质体悬浮液，较后通过减压或氮吹的方法除去有机溶剂即得到脂质体溶液。有机溶剂注入法使用的有机溶剂较难去除，且对水溶性物质的包封率偏低。

4）逆相蒸发法（Reverse-phase evaporation technique）

　　逆相蒸发法即先将脂质材料溶于有机溶剂，再加入水相溶液，较后除去有机溶液，即可获得脂质体溶液。该法制备的脂质体呈多相分布，并且需要进行额外均质处理，且极性溶剂的存在会抑制蛋白的活性，有机溶剂不易去除。

机械法（Mechanical methods）

　　非机械方法制备的脂质体存在均一性差，重复性差、制备的脂质体粒径偏大等缺点。因此，现在常结合一些机械法获得均一稳定的脂质体，常用的机械能量输入的方法如图2 所示：

图2. 脂质体常用制备方法示意图

1）挤出法（Extrusion）

　　挤出法即脂质体通过外力的作用，挤压通过孔径小于自身粒径的滤膜时，由于剪切力的作用导致其发生形变，从而产生破裂，随后破裂的双层立即重新结合，形成更小的脂质体，较终到达滤膜的另一侧。挤出法不接触有机溶媒和去污剂，且该方法制备工艺简便、重现性好。但是挤出法必须在高于Tm 的温度下操作，同时挤出对于脂质体的结构会产生一定的影响。

2）声分散（Ultrasonication disperse）

　　声分散法有两种：探针声法（Direct probe sonicator）和水浴声法(Indirect bath sonicator)。探针声法是制备小单室脂质体的常用方法，它可破坏多室脂质体形成更为均一的小单室脂质体；水浴声相比探针声的破坏性更小些，并且重复性高，脂质体更均一。声处理易引起脂质体溶液温度的升高，产生过热现象，且声波容易导致药物降解的问题。

3）高压均质法（high-pressure homogenization）

　　该法主要依托高压均质机的作用，将类脂质材料溶解后加入含有表面活性剂的水相中，形成初乳后再经高压均质机处理，即可形成粒径小且分布均匀的脂质体溶液。该法制备的脂质体粒径小且分布范围窄。这种方法重复性好，可大规模生产；颗粒均匀，稳定性好。

4）动态高压微射流 (Dynamic high-pressure microfluidization, DHPM)

　　DHPM 是一种新型的高压均质技术，其工作原理是利用液压泵使流体通过并产生高压，在撞击腔内的微孔道中使流体被分散成两股或多股细流，并对其进行强烈的高速撞击，在撞击的过程中大量能量被瞬间转化，产生巨大的压力降，从而实现高速撞击、高频剪切、气蚀、高频振动、瞬时压降等综合作用，在200MPa 压力下，时间小于5 s 即可达到物料的细化、乳化、均质和改性等目的。DHPM 制备的脂质体具有粒径小、分布窄的优点，且包封率高，可实现规模化、连续化的生产。DHPM 在操作过程中要尽量避免脂质体的过度处理，因为过度处理易导致脂质体结构的破坏和包埋物质的泄漏。与传统方法相比较，采用DHPM 技术制备脂质体有许多优点：①可避免使用大量的有毒有机试剂；②制得的脂质体样品粒径小、粒度分布较窄；③可提高脂质体的包封率；④可进行连续化、大规模的商业化生产。

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